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杆状病毒载体表达系统有哪些特点?

来源:www.fanlv.net  时间:2022-08-09 19:15   点击:65  编辑:甘园   手机版

相对其他表达系统它具有以下几个方面的特点: ①重组蛋白具有完整的生物学功能:杆状病毒表达系统可为高表达 的外源蛋白在细胞内进行正确折叠、二硫键的搭配及寡聚物的形成提供良好的环境,可使表达产物在结构及功能上接近天然蛋白。②能进行翻译后的加工修饰:杆状病毒表达系统具有对蛋白质完整的翻译后加工能力,包括糖基化、磷酸化、酰基化、信号肽切除及肽段的切割和分解等,修 饰的位点与天然蛋白在细胞内的情况完全一致:对比实验证明,在昆虫细胞发生的糖基化位点与哺乳动物细胞中完全一致,但修饰的寡糖种类却不完全一样。这种不 一致对不同目的蛋白的活性影响不同,所以昆虫表达系统还可作为一个研究糖基化对蛋白质结构与功能影响方面的理想模型。③表达水平高:与其它真核表达系统相比较,此系统最突出的特点就是能获得重组蛋白高水平的表达,最高可使目的蛋白的量达到细胞总蛋白的50%。④能容纳大分子的插入片段:杆状病毒毒粒可以扩大,并能包装大的基因片段,但目前尚不知杆状病毒所能容纳的外源基因长度的上限。⑤能同时表达多个基因:杆状病毒表达系统具有在同一细胞内同时表达多个基因的能力。既可采用不同的重组病毒同时感染细胞的形式,也可在同一转移载体 上同时克隆两个外源基因,表达产物可加工形成具有活性的异源二聚体或多聚体。另外,昆虫杆状病毒表达系统具有剪切的功能,能表达基因组DNA;还有对重组蛋白进行定位的功能,如将核蛋白转送到细胞核上,膜蛋白则定位在膜上,分泌蛋白则可分泌到细胞外等。最后,杆状病毒对脊椎动物无感染性,现有研究也表明其启动子 在N-%动物细胞中没有活性,因此在表达癌基因或有潜在毒性的蛋白时可能优于其它系统。

哺乳动物器官系统的概念

生物个体由若干个系统组成,如运动系统、消化系统等。
每一个系统由若干个器官组成,如消化系统由口腔、食道、胃肠。。。等器官组成。
每一个器官由若干的组织组成,如眼睛由角膜、虹膜、晶状体。。。等组织组成。
每一个组织都是由形态相似、结构和功能相同的细胞群组成的。
细胞是生物体结构和功能的基本单位。

包涵体怎样产生的,怎样提高大肠杆菌中外源蛋白可溶性表达

按基因工程定义:在某些生长条件下,大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子包涵体,它们致密地集聚在细胞内,或被膜包裹或形成无膜裸露结构,这种水不溶性的结构称为包涵体。
简单的说,就是外源基因在大肠杆菌胞内表达的过程中,因为某些错误的折叠,形成的不溶的无活性的固体颗粒。形成的原因很复杂,比如表达量过高,无法糖基化,组成中含有较多的半胱氨酸之类的氨基酸,离子键疏水键共价键共同的化学作用等。

提高可溶表达的方法也很多
1,降低诱导温度,比如16度诱导。绝大多数蛋白质在降低诱导温度后可以明显提高可溶表达。
2,降低诱导剂的用量,比如0.1mM IPTG诱导。甚至更极端的可以不加诱导剂,形成泄漏表达。这种情况下表达出来的蛋白一定是可溶表达。
3,更换不同的表达载体,表达菌株。比如个人感觉pET28比pET21,Rosetta的菌株比BL21(DE3)更容易可溶表达。
4,更换表达系统增加信号肽,外源基因导入酵母系统或者哺乳动物细胞,只要是能分泌表达一定可溶性表达。

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